摘要：[目的] 優(yōu)選柴胡中黃酮提取的最佳工藝。[方法] 采用正交試驗(yàn)法對(duì)柴胡中黃酮的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，以4個(gè)黃酮類活性成分(蘆丁、槲皮素、山奈素和異鼠李素)的總含量為指標(biāo)，采用液相方法測(cè)定。[結(jié)果] 最佳工藝為在50 ℃的60%乙醇(料液比1∶5)中浸漬30 min，超聲功率80 W提取20 min。[結(jié)論] 該工藝合理，有效成分提取效率高。

　　關(guān)鍵詞：正交試驗(yàn);柴胡;黃酮類化合物;HPLC;提取工藝

　　中藥柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.和狹葉柴胡B.scorzonerifolium Willd.的干燥根，前者習(xí)稱北柴胡，后者習(xí)稱南柴胡。柴胡能散風(fēng)退熱、升陽(yáng)疏肝，用于治療感冒發(fā)熱、寒熱往來(lái)、痢疾、肝郁氣滯、胸脅脹痛、子宮脫垂、脫肛、月經(jīng)不調(diào)等癥。北柴胡主產(chǎn)于河北、河南、遼寧、陜西等。柴胡為常用大宗藥材，其重要的藥用價(jià)值使需求逐年增加，不僅國(guó)內(nèi)需要量大，且大量出口。由于長(zhǎng)期依賴采挖，野生資源及其生境破壞嚴(yán)重，資源已近枯竭，目前商品柴胡主要依賴栽培。柴胡存在嚴(yán)重的種內(nèi)和種間類型混雜的現(xiàn)象，導(dǎo)致柴胡品種優(yōu)劣不等的問(wèn)題。不同地區(qū)使用的藥用部位也不盡相同，藥典規(guī)定柴胡的藥材為柴胡的根，但市場(chǎng)上的藥材往往是根和5～10 cm莖的混品入藥，有人則以地上部分入藥。

　　柴胡中的有效成分為柴胡皂苷、甾醇、揮發(fā)油和多糖等，此外，還含有黃酮類成分。黃酮類化合物對(duì)人體在抗腫瘤、抗衰老及心血管等疾病的治療和預(yù)防有重要意義。如蘆丁具有抗氧化、抗基因突變和降低毛細(xì)血管異常通透性及脆性的作用，臨床上用于治療過(guò)敏性紫癜及各種因毛細(xì)血管脆性增加而引起的出血性疾病，也用于治療高血壓和老年氣管炎等。槲皮素是黃酮類化合物中具有代表性的一種，研究發(fā)現(xiàn)槲皮素具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗糖尿病并發(fā)癥等多種生物活性及藥理作用，對(duì)呼吸道疾病，特別是對(duì)哮喘病和支氣管疾病有較好的作用。

　　目前國(guó)內(nèi)關(guān)于柴胡提取工藝的文獻(xiàn)報(bào)道較多，但多以皂苷類、揮發(fā)油指標(biāo)進(jìn)行考察，很少有單獨(dú)考察黃酮類化合物的文獻(xiàn)，因此，該研究采用正交試驗(yàn)考察柴胡中黃酮類化合物的提取及其不同部位的含量，為提高仿生栽培柴胡的質(zhì)量和療效打下基礎(chǔ)。

　　1材料與方法

　　1.1儀器島津LC-20A型高效液相色譜儀(日本島津制作所);HU312超聲波清洗器(天津奧特賽斯物理光學(xué)儀器廠);賽多利斯BP200S-WEI電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司);電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)。

　　1.2試藥仿生栽培樣品采自黑龍江省的明水縣柴胡種植基地，野生柴胡樣品采自黑龍江省的明水縣本地;蘆丁(批號(hào)100080-200801)、槲皮素(批號(hào)100081-200502)、山柰素(批號(hào) 110861-200805)、異鼠李素(批號(hào)110860-200504)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度均大于98%;乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

　　1.3方法

　　1.3.1柴胡中黃酮類化合物含量測(cè)定。

　　1.3.1.1色譜條件。迪馬C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)，梯度洗脫，0～15 min(5%～20%A)、15～30 min(20%～35%A)、30～45 min(35%～45%A)、45～55 min(45%～50%A)、55～60 min(50%～5%A);洗脫時(shí)間為60 min;檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm;流量1.0 ml/min;柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量20 μl。

　　1.3.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍。準(zhǔn)確稱取蘆丁、槲皮素、山柰素、異鼠李素對(duì)照品各約20 mg，分別置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度?；靹蚝蠓謩e進(jìn)樣2、5、10、20、30 μl，按“1.3.1.1”色譜條件作HPLC分析。以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理，得蘆丁、槲皮素、山柰素、異鼠李素的線性回歸方程和線性范圍(表1)。

　　1.3.2樣品測(cè)定。

　　精密吸取20 μl樣品溶液，在“1.3.1.1”色譜條件下測(cè)定，記錄峰面積，分別計(jì)算相應(yīng)黃酮類化合物的含量，再計(jì)算總量。

　　1.3.3正交試驗(yàn)。以柴胡中4種黃酮類化合物含量的總量

　　為指標(biāo)，設(shè)定pH=7、浸漬時(shí)間30 min、提取時(shí)間20 min，分別以乙醇溶度、料液比、浸漬溫度和超聲功率等主要因素及不同水平進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)(表2)，篩選最佳工藝。

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