柔紅霉素是治療急性白血病的強效蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素。在柔紅霉素發(fā)酵液中存在大量發(fā)酵雜質(zhì)和一些結(jié)構(gòu)十分相似的蒽環(huán)類化合物，對其進行分離和鑒定對柔紅霉素的生產(chǎn)具有重要的指導意義。

　　《科技創(chuàng)業(yè)家》(月刊)創(chuàng)刊于2010年，由中國科學技術(shù)協(xié)會主管,大眾科技報社主辦，面向國內(nèi)外公開發(fā)行的國家級學術(shù)期刊。

　　1 儀器和試藥

　　Shimadzu高效液相色譜儀及相應的化學工作站;GB-204型電子分析天平;KQ-5200DE數(shù)控型超聲波清洗儀;柔紅霉素對照品;柔紅酮、雙氫柔紅酮、雙氫柔紅霉素、柔紅霉素B、阿霉酮和阿霉素對照品;甲醇為色譜純，草酸、碳酸氫鈉、氯仿、無水硫酸鈉、磷酸二氫銨和冰醋酸為分析純，超純水。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

　　色譜柱：Kromasil-C18柱;流動相：甲醇-0.01摩爾/升磷酸二氫銨溶液-冰醋酸(62∶38∶0.2)，流速：1.0毫升/分鐘;柱溫：30℃;檢測波長：233納米;進樣量20微升。

　　2.2 樣品的處理

　　對照品溶液的制備：精密稱取柔紅霉素對照品10.12毫克(91.0%)，置50毫升容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得202.4微克/毫升的柔紅霉素對照品貯備液，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

　　發(fā)酵液的預處理：取柔紅霉素發(fā)酵液100毫升加入草酸3克，50℃加熱1小時后冷卻離心，吸取上清液4毫升加純化水6毫升和6.6%碳酸氫鈉溶液10毫升，混勻后加入2毫升氯仿，振搖，分取氯仿層加無水硫酸鈉脫水后濃縮至干，加甲醇溶解后進行HPLC分析。

　　2.3 方法學驗證

　　線性關(guān)系：分別精密吸取柔紅霉素對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.00毫升于10毫升量瓶中，加甲醇溶解，配制成2.024、4.048、8.096、16.192、20.24微克/毫升的溶液。按上述色譜條件分別進樣20微升，以峰面積(A)對對照品質(zhì)量濃度C(微克/毫升)進行線性回歸，回歸方程：

　　A=156.98C+2.911(r=0.9995)。

　　加樣回收試驗：為驗證方法的可靠性，在已測定含量的發(fā)酵液中加入不同量的柔紅霉素標準品，由測得結(jié)果計算回收率，結(jié)果見表1，平均回收率為99.93%，RSD為1.89%。

　　3 結(jié)論

　　本文以甲醇-0.01摩爾/升磷酸二氫銨溶液(pH4.5)-冰醋酸(62∶38∶0.2)為流動相時柔紅霉素峰形良好，分離度高。筆者采用柔紅霉素發(fā)酵液酸化后萃取法除去干擾雜質(zhì)后測定發(fā)酵液中柔紅霉素含量的高效液相色譜法，為進一步研究奠定基礎(chǔ)。