摘 要： 為了分析水燭香蒲花粉和莖葉中黃酮類成分，以及不同生長(zhǎng)期、不同部位中香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷和異鼠李素含量。該文采用UPLC-Q-TOF-MS進(jìn)行定性分析，結(jié)合HPLC法對(duì)水燭香蒲不同部位中黃酮類化合物含量進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，色譜條件為PRAZIS C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.05%磷酸為流動(dòng)相，梯度洗脫，體積流量1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果表明：(1)花粉及莖葉中共解析出42個(gè)化合物，其中8個(gè)化合物在不同部位中有差異。(2)同一生長(zhǎng)環(huán)境的水燭香蒲不同生長(zhǎng)時(shí)期、不同部位中3種黃酮類化合物的含量差異較大。(3)異鼠李素-3-O-新橙皮苷及異鼠李素在香蒲的發(fā)育生長(zhǎng)過(guò)程中含量呈先增加后下降的趨勢(shì)，莖葉內(nèi)的這兩種成分含量下降明顯;在花粉中，香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷含量急劇上升，一周內(nèi)達(dá)到峰值;莖葉中香蒲新苷含量較低，在大多數(shù)樣品中未檢出。該研究所建立的測(cè)定方法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，并對(duì)水燭香蒲中黃酮類成分的含量變化規(guī)律進(jìn)行了研究，對(duì)花粉及莖葉中化合物差異進(jìn)行了分析，為蒲黃的合理采收及香蒲植物的資源化利用提供了科學(xué)依據(jù)。

　　關(guān)鍵詞： 水燭香蒲， 香蒲新苷， 異鼠李素-3-O-新橙皮苷， 異鼠李素， 動(dòng)態(tài)分析

　　香蒲屬(Typha)植物為香蒲科(Typhaceae)多年生水生或沼生植物，廣泛分布于熱帶至溫帶地區(qū)(王茹等，2013)，全世界有24種，其中我國(guó)分布有12種。《中國(guó)藥典》2015版規(guī)定，蒲黃藥材為水燭香蒲(Typha angustifolia)、東方香蒲(T. orientalis)或同屬植物的干燥花粉(國(guó)家藥典委員會(huì)，2015)，具有止血、化瘀、通淋之功效(代玄燁，2017)。蒲黃中含有黃酮類、酚酸類、腦苷、腺苷、甾體類及多糖類等多種成分(陳毓等，2015;白雪薇等，2018;Zeng et al.， 2018)，其中黃酮類成分為其主要有效成分，具有改善胰島素抵抗、抑制炎癥、改善血液流變學(xué)狀態(tài)以及止血及抗氧化等作用(Chen et al.， 2017;Lei et al.， 2018)。

　　香蒲屬植物的莖葉與花粉的化學(xué)成分組成類似，均有促進(jìn)傷口愈合的作用(Ondua et al.， 2019)。除藥用外，香蒲屬植物在食品、飲料、保健品、材料、肥料、工藝品中也有廣泛應(yīng)用，而且在水體環(huán)境保護(hù)方面，香蒲屬植物具有獨(dú)特的應(yīng)用價(jià)值(陳佩東等，2015)。前期開展的江蘇省中藥資源普查過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，江蘇地區(qū)的香蒲屬植物野生資源量較大，主要以花粉利用為主，但是莖、葉等其他部位的資源化利用并不充分。蒲黃一般在每年6月份采收(嚴(yán)華等，2019)，由于分布廣泛，地理生態(tài)環(huán)境、采收方式等因素的影響，各地采收的花粉中化學(xué)成分的組成存在較大差異，同時(shí)，花粉中化學(xué)成分的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律也需要深入研究。因此，本課題組首先在江蘇省南京市進(jìn)行了定點(diǎn)連續(xù)采樣，然后基于UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對(duì)水燭香蒲花粉、莖葉中的化學(xué)成分進(jìn)行定性研究，同時(shí)基于HPLC技術(shù)對(duì)水燭香蒲不同生長(zhǎng)時(shí)期花粉和莖葉中3種黃酮類化合物(香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷和異鼠李素)的含量進(jìn)行定量分析，以期探究香蒲屬植物的資源性化學(xué)成分在不同部位的分布情況以及積累的動(dòng)態(tài)，為香蒲屬植物的資源化學(xué)成分的進(jìn)一步動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)及開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 儀器 AB SCIEX Triple TOFTM 5600質(zhì)譜儀，電噴霧離子源(ESI)(美國(guó)AB SCIEX公司)，TF 1.6 Analyst工作站以及Peak View分析軟件，配備LC-20A型液相色譜儀(日本島津公司)。Agilent 1290高效液相色譜儀;Micro CL21R高速冷凍離心機(jī)(Thermo Fisher Scientific);JY10002電子天平(上海上平儀器有限公司);掃描電鏡(日本Hitachi S-4800);420三用恒溫水箱(江蘇金壇國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠);KQ-500B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);DHG-9023A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);TGL-16C型高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

　　1.1.2 試劑 對(duì)照品：香蒲新苷(批號(hào)：Y14S8H43976)，異鼠李素-3-O-新橙皮苷(批號(hào)：H30M3X1)，異鼠李素(批號(hào)：P23A9F68614)，琥珀酸(批號(hào)：B20937)，對(duì)羥基苯甲酸(批號(hào)：MKBK3576V)，山奈酚-3-O-葡萄糖苷(批號(hào)：Y19M8H36474)，異鼠李素-3-O-蕓香糖苷(批號(hào)：S08A8D33447)，槲皮素(批號(hào)：C09S8Y43412)，柚皮素(批號(hào)：X21M7C11378)，山柰酚(批號(hào)：C26J8Y38642)均購(gòu)自源葉生物科技有限公司。甲醇(色譜純，批號(hào)：180975，江蘇漢邦科技有限公司);乙腈(色譜純，批號(hào)：SHBK5734，默克股份有限公司);磷酸(色譜純，批號(hào)：C1801089，阿拉丁)。

　　1.1.3 藥材 蒲黃樣品采集于江蘇省南京市棲霞區(qū)仙林湖(118°58′59.33″ E、32°07′28.38″ N)，原植物經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源學(xué)教研室嚴(yán)輝副教授鑒定為香蒲科植物水燭香蒲(Typha angustifolia)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 蒲黃樣品采集及前處理 自2019年3月31日起，每隔7天采集一次樣品，至有雄花序后，每2天采集1次花粉。采集的蒲黃莖葉，記錄生長(zhǎng)情況。樣品性狀見(jiàn)圖1，樣品株高及基部直徑數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。60 ℃恒溫干燥后打粉，過(guò)三號(hào)篩。蒲黃花粉置紗篩中，保持水平狀態(tài)過(guò)篩，除去雜質(zhì)。

　　花粉在用掃描電鏡拍照前，經(jīng)過(guò)如下處理：將花粉粒固定在甲醛溶液(5 mL 38%甲醛、5 mL冰醋酸、90 mL 50% 乙醇和5 mL甘油)中，在24 ℃下，分別用濃度為70%、80%、90%、95%和100%的乙醇溶液水合20 min。分別用乙醇和乙酸異戊酯混合溶液(比例為75%∶25%、50%∶50%、25%∶75%和100%乙酸異戊酯)處理20 min，4 h后冷凍干燥(Gao et al.， 2019)。

　　1.2.2 UPLC-Q-TOF-MS分析

　　1.2.2.1 液相色譜條件 Waters ACQUITYTM UPLC HSS T3色譜柱(100 mm × 2.1 mm， 1.8 μm)，流速 0.3 mL·min-1，柱溫 30 ℃，進(jìn)樣量 4 μL，流動(dòng)相為0.1%甲酸水溶液(A)(v/v)，乙腈(B)，梯度洗脫為0～10 min，15% B;10～15 min，15%～30% B;15～25 min，30%～50% B;25～28 min，50%～15% B;28～30 min，15%(Ding et al.， 2018)。

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