摘要：ATRA對(duì)APL初發(fā)患者完全緩解率可達(dá)85%以上，但對(duì)復(fù)發(fā)患者再次應(yīng)用ATRA則效果不佳，其原因可能是ATRA對(duì)參與其代謝的酶活性具有自身誘導(dǎo)作用，持續(xù)用藥導(dǎo)致血藥濃度逐步降低[1]。本文參考文獻(xiàn)[2-4]，建立了一種靈敏、準(zhǔn)確的ATRA血藥濃度HPLC測(cè)定法，旨在為全反式維甲酸臨床血藥濃度監(jiān)測(cè)及人體藥代動(dòng)力學(xué)研究提供測(cè)定方法。文章選自：《中國(guó)體視學(xué)與圖像分析》學(xué)術(shù)期刊是一級(jí)學(xué)會(huì)——中國(guó)體視學(xué)學(xué)會(huì)的會(huì)刊，1996年創(chuàng)刊。全面反映中國(guó)體視學(xué)理論和圖像應(yīng)用技術(shù)研究的學(xué)術(shù)性綜合刊物，報(bào)道國(guó)內(nèi)外有關(guān)三維結(jié)構(gòu)與圖像的定量分析和表征的最新理論和方法，內(nèi)容涉及體視學(xué)，圖像分析，三維視覺(jué)等。

　　《中國(guó)體視學(xué)與圖像分析》語(yǔ) 言：中文，主管單位：中國(guó)科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì)，主辦單位：中國(guó)體視學(xué)學(xué)會(huì)，創(chuàng)刊時(shí)間：1996年，出版周期：季刊，國(guó)內(nèi)刊號(hào)：CN11-3739/R，國(guó)際刊號(hào)：ISSN1007-1482

　　1 材料與方法

　　1.1 儀器

　　Waters高效液相色譜儀(515型恒流泵，486型紫外檢測(cè)器，Millennium32色譜工作站);XW―80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠);3K18高速冷凍離心機(jī)(Sigma);高速離心機(jī)(美國(guó)雅培公司TDx儀附件)。

　　1.2 藥品與試劑

　　ATRA對(duì)照品(Sigma,純度：98%)，阿維A酸(內(nèi)標(biāo)，羅氏公司)，甲醇為色譜純?cè)噭?，其余試劑均為分析純?/p>

　　1.3 色譜條件

　　色譜柱為Supelcosil LC18DB柱(5 μm，4.6 mm×250 mm);柱溫為室溫。流動(dòng)相：甲醇水冰乙酸(體積比82∶17∶1);流速1.5 mL?min-1。檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm。

　　1.4 血藥濃度測(cè)定法

　　1.4.1 ATRA對(duì)照溶液配制

　　精密稱取ATRA對(duì)照品適量，以甲醇溶解并定容，制得濃度為100 μg?mL-1的ATRA儲(chǔ)備液。將ATRA儲(chǔ)備液以甲醇稀釋，配制濃度分別為0.5、1、2.5、5、10、25、50 μg?mL-1的ATRA對(duì)照溶液。

　　1.4.2 內(nèi)標(biāo)液配制

　　取內(nèi)標(biāo)阿維A酸適量，置于100 mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，制得濃度為7.5 μg?mL-1的內(nèi)標(biāo)液。

　　1.4.3 樣本處理

　　精密吸取血漿樣品1 mL，置10 mL具塞離心試管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，旋渦混合30 s。加入1 mol?L-1的HCl溶液500 μL，漩渦混合30 s，再加入乙酸乙酯3 mL，旋渦混合1 min，4 500 r/min離心5 min。轉(zhuǎn)移上層液至尖底試管中，于37 ℃水浴中氮?dú)饬鞔蹈?。殘?jiān)尤肓鲃?dòng)相200 μL漩渦混合30 s使溶解，10 000 r/min離心5 min，取上清液50 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以ATRA峰面積(As)與內(nèi)標(biāo)峰面積(Ai)之比代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算ATRA血藥濃度。

　　1.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　精密量取空白血漿1 mL，置10 mL具塞離心管中，分別加入不同濃度ATRA對(duì)照溶液20 μL，混勻，使血藥濃度分別為10、20、50、100、200、500、1000 ng?mL-1。按樣本處理方法操作，以不同濃度ATRA系列溶液的As和Ai來(lái)計(jì)算A(A=As/Ai)，以A值為縱坐標(biāo)，ATRA質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)進(jìn)行直線回歸。

　　1.4.5 回收率及精密度

　　分別于1 mL空白血漿中加入低、中、高3種濃度的ATRA對(duì)照溶液20μL，混勻，使其濃度分別為10、200、1000 ng?mL-1，按樣本處理方法操作，計(jì)算ATRA血藥濃度，以測(cè)得濃度與配制濃度之比計(jì)算方法回收率。另以甲醇配制相應(yīng)系列濃度的ATRA溶液，不經(jīng)提取直接測(cè)定，以此為標(biāo)準(zhǔn)，將兩組峰面積相比，計(jì)算ATRA萃取回收率。以1 d內(nèi)測(cè)得的ATRA濃度計(jì)算日內(nèi)精密度，以1周內(nèi)5次測(cè)定的ATRA濃度計(jì)算日間精密度。

　　2 結(jié) 果 1 色譜行為

　　在上述色譜條件下，ATRA與內(nèi)標(biāo)物及血漿內(nèi)源性物質(zhì)能夠較好分離，ATRA與內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為8.8 min和6.7 min?？瞻籽獫{及血漿樣品色譜圖見(jiàn)圖1。 2 線性范圍

　　ATRA血藥質(zhì)量濃度(ρ)在10～1000 ng?mL-1范圍內(nèi)，與峰面積比(A)有良好線性關(guān)系，其回歸方程為：A=00116ρ+0.0036，r=0.9997。以信噪比S/N=3：1計(jì)，ATRA最低檢測(cè)濃度為2.5 ng?mL-1。 3 回收率及精密度

　　高、中、低3種濃度的提取回收率分別為(84.6±5.2)%、(81.2±6.3)%、(81.6±4.6)%，平均方法回收率為(94.5±4.7)%(n=15)。3種濃度的日內(nèi)RSD≤4.1%，日間RSD≤6.2%。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 回收率及精密度(略)

　　3 討 論

　　本文建立了一種靈敏、準(zhǔn)確的ATRA血藥濃度高效液相色譜測(cè)定法，適用于APL病人ATRA 血藥濃度的常規(guī)監(jiān)測(cè)及臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究。通過(guò)監(jiān)測(cè)ATRA血藥濃度，可以更好地了解在某些APL病人連續(xù)用藥治療中臨床復(fù)發(fā)及耐藥的原因。

　　ATRA化學(xué)性質(zhì)活潑，見(jiàn)光易異構(gòu)化或氧化降解，因此在樣品提取過(guò)程中應(yīng)特別注意避光操作。提取過(guò)程中血漿加入1 mol?L-1 HCl溶液，使血漿酸化，可提高萃取回收率，乙酸乙酯一步萃取可使萃取回收率達(dá)到80%以上。

　　由于ATRA中的羧基可以與色譜柱中的硅醇基等發(fā)生相互作用，導(dǎo)致色譜峰拖尾，在流動(dòng)相中加入1%(ω)醋酸，可抑制這種作用，消除ATRA峰拖尾現(xiàn)象。