摘要：分別取6批樣品，按供試品溶液的制備操作，測(cè)定每粒膠囊中人參皂苷Rb1的含量，結(jié)果顯示，6批樣品中最高含量為1.28 mg 最低為0.91 mg，考慮大生產(chǎn)及原料來(lái)源，放寬10 %，故暫擬定本品每粒含人參以人參皂苷Rb1計(jì)，不得小于0.82 mg。

　　關(guān)鍵詞：健腦益智膠囊,高效液相色譜,人參皂苷Rb1,含量測(cè)定

　　健腦益智膠囊是由本院長(zhǎng)期臨床驗(yàn)方研制而成, 由人參、何首烏、枸杞子等藥物組成, 具補(bǔ)氣養(yǎng)血、健腦益智之功效。用于氣血兩虛導(dǎo)致的失眠、健忘等癥。其中人參為方中君藥, 起補(bǔ)中益氣之功效，皂苷類(lèi)成分是人參中的主要化學(xué)成分，其中人參皂苷Rb1為主要有效成分之一。本試驗(yàn)選擇以人參皂苷Rb1作為含量測(cè)定的指示性成分，針對(duì)本制劑特點(diǎn)，通過(guò)采用高效液相法測(cè)定人參皂苷Rb1的含量，以期為控制本制劑質(zhì)量提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

　　1 器材與藥品

　　1.1 儀器島津LC10AC高效液相色譜儀，島津SPD10A紫外檢測(cè)器，島津C7R色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)，SK2200H型超聲清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

　　1.2 試藥人參皂苷Rb1對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所);樣品：本院制劑室生產(chǎn)(批號(hào)：20031103、20031113、20031203、20031213、20031223、20040103)。本實(shí)驗(yàn)所用試劑除洗脫劑為色譜純外，其它均為分析純。

　　2 方法和結(jié)果

　　2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)　色譜柱：C18;流動(dòng)相：乙腈水(30∶70);流速0.8 ml?min1;檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm;進(jìn)樣量：20μl，分析方法：外標(biāo)法;理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，分離度大于1.5。

　　2.2 溶液的制備

　　2.2.1 對(duì)照品溶液精密稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品2.0362 mg，置10 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得0.2 mg?ml1的對(duì)照品溶液。

　　2.2.2 供試品溶液取100粒膠囊內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取10 g 置錐形瓶中，精密加入甲醇100 ml，稱定重量，超聲30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25 ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干。殘?jiān)运柡偷恼〈?0 ml分次轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氨試液振搖提取3次，10 ml/次，合并水層液，用水飽和的正丁醇提取5次，15 ml/次。合并正丁醇提取液，用正丁醇飽和的水洗滌2 次,15 ml/次。合并水層液，再以水飽和的正丁醇15 ml提搖提取2次。合并正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状嫁D(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm) 濾過(guò)。

　　2.2.3 陰性溶液的制備　按處方量稱取不含人參的其他藥味，按制劑工藝制成制劑后，以供試品溶液制備方法制成陰性溶液。

　　2.3 色譜分離及空白實(shí)驗(yàn)取人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性溶液分別進(jìn)樣，供試液色譜圖中人參皂苷Rb1峰分離良好，理論板數(shù)大于4 000 (n = 5) ，分離度均大于1.5，陰性溶液在人參皂苷Rb1出峰處不干擾。

　　2.4 線性關(guān)系考察精密吸取人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml 置10 ml 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣20 μl。以峰面積與對(duì)應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y= 39 307X - 51 893，r = 0.999 9。結(jié)果表明人參皂苷Rb1在0.407～3.258 mg線性關(guān)系良好。

　　2.5 穩(wěn)定性取供試品溶液，分別放置2，4，6，8，14，24 h測(cè)定峰面積1次，RSD 為1.36 %，說(shuō)明供試品在24 h 內(nèi)是穩(wěn)定的。

　　2.6 精密度實(shí)驗(yàn)取0.204 mg?ml1的人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得人參皂苷Rb1峰面積的RSD為0.47%。

　　2.7 樣品測(cè)定

　　2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)精密稱取已知人參皂苷Rb1含量的樣品(批號(hào)為20031213)6份，分別加入人參皂苷Rb1對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法提取樣品，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。見(jiàn)表2。表2 回收率實(shí)驗(yàn)(略)

　　3 討論

　　3.1 文獻(xiàn)報(bào)道中人參皂苷Rb1的測(cè)定方法很多[1，2]，參考上述文獻(xiàn)報(bào)道選擇HPLC法實(shí)驗(yàn)，在流動(dòng)相的選擇上我們比較了乙腈甲醇純水0. 05 %磷酸水溶液( 20∶40∶10∶30);乙腈水(40∶60)、(35∶75)、(30∶70)，結(jié)果以乙腈水(30∶70)為流動(dòng)相分離效果最好，人參皂苷Rb1能與其它成分的峰達(dá)到極限分離。

　　3.2 在樣品提取時(shí)，選擇甲醇回流1 h，超聲提取30，45，60 min 4種方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)比較，發(fā)現(xiàn)以甲醇超聲提取30 min，提取效果最好。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]楊 瑩，景 瑞，王 妮. 頸痛片中人參皂苷Rb1 的HPLC 測(cè)定方法[J].食品與藥品，2005，7 (3A ):58.

　　[2]趙德華，楊德智.HPLC測(cè)定田七痛經(jīng)膠囊中人參皂苷Rb1、Rg1 的含量[J].中成藥，2005，27(5):532.